在育種工作中，有時需要將花粉保存一段時間。雖然人們已經(jīng)知道，花粉保存以溫度較低（0～15℃），空氣濕度稍干（不能太干）、黑暗條件下為宜。但是各種不同植物花粉壽命長短相差懸殊，這一是由花粉本身的特征決定的，二是由貯藏條件決定的。一般來說，禾谷類作物花粉的壽命較短，自花授粉植物花粉的壽命尤其短，如小麥在花藥開裂后30min，花粉即由鮮黃色變?yōu)樯铧S色，此時已有大量花粉喪失活力。在許多特殊條件下，花粉的生活力的測定顯的很重要，如：

1．外地采集來的花粉或雜交時父本花期早于母本時都要將花粉進(jìn)行短暫貯藏；

2．自交或遠(yuǎn)緣雜交時，為了分析結(jié)實(shí)率或不結(jié)實(shí)原因時；

3．為了鑒定雄性不育系時；

4．了解某些雜交技術(shù)時，如測定花粉的刺激等作用，測定受精選擇性等。

      因此，要根據(jù)各種植物花粉的特點(diǎn)，采取適當(dāng)?shù)谋４娣椒??；ǚ凵盍Φ臏y定方法很多，其中發(fā)芽試驗(yàn)手續(xù)較復(fù)雜，設(shè)備要求較高，需時也較長。為了簡易而迅速的測定花粉生活力，也常采用化學(xué)染色的方法，但是此法也有缺點(diǎn)，就是染上色的花粉不一定都具有生活力，因?yàn)槿旧仙幕ǚ壑幸舶四切┥盍θ醪荒苷０l(fā)芽的花粉，所以一般常用而且較為可靠的方法仍然是采用花粉發(fā)芽實(shí)驗(yàn)。要是要求不嚴(yán)格對新采集的花粉還有一個較簡便的鑒定方法——形態(tài)鑒定法。

      本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菍W(xué)習(xí)花粉生活力測定的方法，進(jìn)而研究花粉壽命長短與環(huán)境條件的關(guān)系，以探求保存花粉的合適方法。

一、試材及用具

1．材料：幾種植物的不同處理花粉；如：小麥、玉米、大白菜、黃瓜、杏、蘋果等。

2． 試劑 ：配制好的緩沖液、聯(lián)苯胺液、過氧化氫液、TTC粉、蔗糖、瓊脂等；

3．用具：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、凹面載玻片、玻璃棒、擦鏡紙、吸水紙、標(biāo)簽紙、鉛筆。

二、方法步驟

   （一）直接檢驗(yàn)法

      每個實(shí)驗(yàn)小組選定同品種種株去雄。注意：選用的花蕾最好是花前1～2d，且發(fā)育正常、飽滿。每天去雄20個花蕾，然后套袋隔離，連續(xù)5d，共100朵花。這一實(shí)驗(yàn)要和花粉貯藏實(shí)驗(yàn)相配合，即花粉貯藏的當(dāng)天開始去雄。授粉時，每去雄一次，分別授以兩種不同貯藏條件下的花粉（各10朵），連續(xù)5d，就使得貯藏期分別為當(dāng)天、第二天、第三天、第四天、第五天的花粉授到了去雄后的花蕾上。實(shí)驗(yàn)時，一定要掛牌標(biāo)好品種、花粉貯藏期、貯藏條件、株號、授粉日期、授粉人。等最后一個處理完后十天，檢驗(yàn)結(jié)實(shí)率和結(jié)籽率。

   （二）染色鑒定法（TTC法）

      TTC即2、3、5－三苯基四唑氯化物。主要原理在于檢驗(yàn)花粉呼吸過程中去氧酶的活性。具有生活力的花粉的脫氫酶，在催化去氫的過程中，把氫轉(zhuǎn)移到其他的物質(zhì)上去，使用TTC與催化過程中產(chǎn)生的氫結(jié)合成紅色化合物，從而使具有生活力的花粉變?yōu)榧t色。

1．先配制下列溶液

（1）磷酸緩沖液：在100毫升的 蒸餾 水中，溶解0.832克的磷酸氫二鈉和0.273克的磷酸二氫鉀，調(diào)整PH值為7.17。

（2）TTC溶液：稱取0.02～0.05克（不同植物所用的量是不同的）的TTC溶解在10ml的磷酸緩沖液中，溶液配好后裝入棕色滴瓶內(nèi)，置入暗處，因氯化三苯基四唑有毒，操作時要注意安全。

2．操作步驟：

（1）取少量花粉放在載玻片上，并在花粉上滴上1～2滴配制液，用玻璃棒混合后蓋上蓋玻片。

（2）將載玻片置于人工氣候箱中（35～40℃）約15～20min。

（3）在顯微鏡（10×10）下觀察：凡具有生活力的花粉呈紅色，部分喪失生活力的呈淡紅色，無色的是死的和不育的花粉粒。

3．觀察和測定結(jié)果：每片觀察3個視野，并統(tǒng)計(jì)具有生活力花粉的百分率。

（三）發(fā)芽測定法（培養(yǎng)基培養(yǎng)法）

1．培養(yǎng)基的配制

      常用的花粉發(fā)芽培養(yǎng)基有液體和固體兩種。以前者最為簡便。本實(shí)驗(yàn)選用前者。其有效成分主要有：蔗糖、硼酸、檸檬酸、赤霉素等。不同的植物所用的蔗糖培養(yǎng)液的濃度是不同的，配制3～30%的蔗糖培養(yǎng)液：在100ml水中，加糖3～30g，加熱溶解后，再加0.1%硼酸數(shù)滴。

2．制片

      取雙凹載玻片，滴2滴培養(yǎng)液于槽中，用解剖針挑少許花粉均勻撒于培養(yǎng)液的表面（注意不必攪拌，以防花粉混于液體中因缺少空氣而影響發(fā)芽，又因花粉深淺不一而在顯微鏡檢查時因光線折射而不易觀察。）處理好后，放于一下部添有少量 蒸餾 水、內(nèi)有兩根玻璃棒的培養(yǎng)皿中（注意不要使水沒過載玻片），放到恒溫為25℃左右的人工氣候箱中或室內(nèi)2h。

3．鏡檢

      將放置2h后的載玻片取出，放在顯微鏡下觀察三個視野，統(tǒng)計(jì)總花粉數(shù)與發(fā)芽的花粉數(shù)，然后計(jì)算比例。

（四）形態(tài)鑒定法

      對于新采集的花粉來說，還有一個更為簡便的鑒定方法——形態(tài)鑒定法。將花粉用解剖針播于一般載玻片上，然后直接放到顯微鏡下觀察，根據(jù)形態(tài)特征，判斷花粉的生活力狀況，一般來說，畸形、皺縮、小形化等均為無生活力花粉，而有光澤、飽滿、具有本品種花粉典型特征等性狀的均為有生活力花粉。