所需設(shè)備和容器

超凈臺(tái)

生物安全柜

細(xì)胞培養(yǎng)箱

顯微鏡

各種size的細(xì)胞瓶、細(xì)胞皿，還有細(xì)胞培養(yǎng)板。請(qǐng)注意（細(xì)胞皿底部是要經(jīng)過處理的喲，不然細(xì)胞無法貼壁。

相關(guān)知識(shí)

何為細(xì)胞培養(yǎng)？

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行，在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中，把細(xì)胞處理好，根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞就像花花草草，尤其是細(xì)胞株基本每天都要觀察、打理的哦！

培養(yǎng)的細(xì)胞從哪里來？

1.細(xì)胞株

簡單說就是買的或送的。

2.原代細(xì)胞

組織或血液中提取的。一般細(xì)胞株可以連續(xù)傳代，而原代細(xì)胞養(yǎng)著養(yǎng)著就掛了。

培養(yǎng)細(xì)胞的生長方式有哪些？

1.貼壁生長

必須貼附于支持物表面才能生長。見于各種腫瘤細(xì)胞等。（你把培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶底朝上，細(xì)胞也不會(huì)掉下來。

2.懸浮生長

于懸浮狀態(tài)下即可生長，不需要貼附于支持物表面。見于各種造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞等。

PS：

每代貼附生長細(xì)胞的生長過程分為：

1）游離期：細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)，也稱懸浮期 。

2）貼壁期：細(xì)胞貼附于（膠原、玻璃、塑料、其他細(xì)胞等）。

3）潛伏期：細(xì)胞有省長活動(dòng)而無細(xì)胞分裂。

4）對(duì)數(shù)生長期：細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間變化成倍增長，活力十足，MAX適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

培養(yǎng)細(xì)胞需要怎樣的生長條件？

1.細(xì)胞的營養(yǎng)需要

2.細(xì)胞的生存環(huán)境

溫度：37℃

O2：95%

CO2：5%

PH：7.2-7.4

一定的滲透壓

3. 無污染

4.無毒

細(xì)胞*培養(yǎng)基的組成有哪些？

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：80-95%

血清：5-20%

碳酸氫鈉：2.0g/L

青、鏈霉素：各200單位/毫升

細(xì)胞傳代

Q1：何為細(xì)胞傳代？

細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時(shí)間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿即為細(xì)胞傳代。

Q2:為什么要傳代？

簡單說就是“孩子”長大了，要“分家”！

細(xì)胞株在培養(yǎng)過程中數(shù)量會(huì)不斷增多，但是培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞瓶/皿的空間有限，就會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞之間接觸過于緊密，會(huì)使得細(xì)胞增殖收到抑制，所以我們必須把其中一部分細(xì)胞轉(zhuǎn)移到別的細(xì)胞瓶/皿，讓細(xì)胞有足夠的生長空間。

Q3:什么時(shí)候傳代？

觀察培養(yǎng)基是否正常，細(xì)胞狀態(tài)如何，細(xì)胞密度如何，決定是否傳代。如培養(yǎng)基變黃，細(xì)胞長成致密單層等情況。

Q4：傳代方法有哪些？

1.懸浮生長細(xì)胞傳代

1)離心法傳代：離心1000轉(zhuǎn)/分去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。

2)直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁上，將上清培養(yǎng)液去除1/2~2/3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。

2.半懸浮生長細(xì)胞傳代

此類細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但是貼壁不牢，可用直接吹打使細(xì)胞從瓶壁上脫落下來，進(jìn)行傳代。

3.貼壁生長細(xì)胞傳代

采用胰酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

靠技術(shù)“馴化”細(xì)胞

1） 嚴(yán)格無菌操作，多噴噴酒精，要是對(duì)滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。
2） 不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套。
3） 有可能的話在拿到新細(xì)胞的時(shí)候做好支原體衣原體檢測(cè)。
4） 水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動(dòng)加濕的話，盤里的水也會(huì)很臟，勤換 (滅菌水加進(jìn)去)。
5） 晚上離開的時(shí)候建議給細(xì)胞房照紫外，超凈臺(tái)是用完就開紫外（記得照30min后關(guān)掉）。
6） 同一時(shí)間就你一個(gè)人在用細(xì)胞房在養(yǎng)細(xì)胞。

靠內(nèi)心"感動(dòng)"細(xì)胞

1） 自己的細(xì)胞自己養(yǎng)，血的教訓(xùn)。
2） 在生物安全柜 (或者超凈臺(tái))，槍頭，血清管，血清，培養(yǎng)基，瓶子，培養(yǎng)箱都足夠好，并且細(xì)胞房有良好的衛(wèi)生措施 (比如隔離服，手套，口罩，清潔，HEPA 等等) 且不違反操作原則的情況下，你其實(shí)很難污染。
3） 上述條件不完備的情況下，就要多注意無菌操作了：比如要用的東西提前拿到臺(tái)子里照啊 (不過這個(gè)其實(shí)也不大好，因?yàn)闀?huì)擋住紫外線)，使用前 SDS+酒精擦臺(tái)子，進(jìn)出超凈臺(tái)一定要酒精擦手。
4） 少對(duì)細(xì)胞說話，多靠內(nèi)心來感動(dòng)它們 (是的! 心不誠是不可以的!)

養(yǎng)細(xì)胞就像打仗，知彼知己，百戰(zhàn)不殆！只有了解你養(yǎng)的對(duì)象，才能把它養(yǎng)好！